徠卡顯微課堂：常溫超薄切片光電關聯技術的應用

受徠卡顯微系統生命科學應用部的邀請，2021年1月28日清華大學蛋白質研究技術中心冷凍電鏡平臺的博士后，李英博士，在徠卡網絡直播平臺講解了生物樣品光電關聯技術的應用。

李英，清華大學蛋白質研究技術中心冷凍電鏡平臺博士后，負責開發細胞電鏡制樣相關的實驗方法。自2006年以來一直從事電鏡制樣相關工作，在常溫包埋、免疫標記、高壓冷凍制樣、冷凍超薄切片制樣方面有著豐富的經驗，自2014年以來服務的用戶電鏡結果發表在Cell、Nature、Nature cell biology等50余篇雜志上。

通過熒光染料、免疫熒光標記和遺傳標簽等蛋白定位成像工具，光學顯微鏡可以對細胞樣品進行多色和實時動態成像，但缺點是由于分辨率的限制，無法顯示細胞的超微結構；另一方面，電子顯微鏡的圖像分辨率遠超光學顯微鏡，卻只能采集靜態細胞無熒光標記信息的黑白圖像。光電關聯技術（Correlative light and electron microscopy，CLEM）可以將兩種技術的優點整合在一起，應用于細胞生物學研究。


 

李英老師在報告中總結了當前生物樣品光電聯用技術的幾種技術路線，包括冷凍光電關聯技術（Cryo-CLEM）和常溫超薄切片光電關聯技術。其中冷凍光電關聯技術可以把樣品培養或吸附在載網上，光鏡拍攝活細胞圖像,出現感興趣的現象后采用投入冷凍固定樣品，再進行冷凍熒光成像，Cryo FIB (可選）和Cryo ET；其中對于生物組織或細胞團樣品，也可以用高壓冷凍儀進行冷凍固定，之后進行冷凍超薄切片或Cryo FIB；或者引入Tokuyasu免疫標記技術。


而在常溫CLEM技術應用中，可以采用高壓冷凍和冷凍替代的實驗流程制備生物樣品，選用合適的熒光標簽、包埋樹脂、染料和固定液等實驗試劑，實現在熒光顯微鏡和電鏡下觀察同一樣品或同一樣品切片的圖像。

李英老師在生物樣品光電聯用方面有著豐富的實踐經驗，在報告中通過兩個實際案例，講解了培養在光蝕刻共聚焦培養皿上的細胞使用光電聯用和連續切片的實驗過程和結果，和常溫超薄切片通過Mirror CLEM軟件實現圖像定位和圖像合并的應用案例。

在本次技術講座的后，李英老師介紹了清華大學蛋白質研究技術中心冷凍電鏡平臺可以提供的生物電鏡制樣和成像服務范圍，然后回答了直播過程中觀眾的提問。限于時間關系，部分問題沒有來得及做詳細解答，觀眾后期也可以聯系李英老師，歡迎大家進行生物電鏡制樣方面的技術交流！

李英老師的本次技術講座總結了生物樣品光電關聯技術的幾種實驗方法，細致的講解了其中幾種實驗方法的操作流程，還通過具體的實驗案例介紹其中關鍵的操作細節，拓展了生物超薄切片用戶的視野，對從事生物電鏡制樣工作的老師有非常好的啟迪意義，是一次珍貴的、高價值的經典課程！

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