如何利用激光顯微切割來改善生物標記物工作流程

癌癥研究：快速可再現的生物標記物探索

生物標記物可用作特定疾病如癌癥的指征標記。這樣一來，腫瘤微環境就容易引起人們的警覺。但在腫瘤區域和非腫瘤區域以及腫瘤本身之間存在著明顯的分子差異。這些情況只能通過分離這些區域的特定的、微小的部分來破譯。

 


所以，徠卡LMD系統允許直接將樣本收集到下游的分析容器如PCT微管當中用于快速組織均質化、蛋白質提取和酶解。
壓力循環技術（PCT, PressureBioSciences Inc.）利用高壓為大規模分析加快樣本制備。PCT可在1小時內完成對LMD樣本的處理，更大的活檢組織塊則可在3小時內完成處理。
此聯用技術可以高精度、快速地分離腫瘤微環境。來自不同組織區域的下游分子分析將帶來重大意義，因為下游分子可以進行單獨分析，而不用再作為混合物加以分析。
 
 




激光顯微切割利用激光在細胞層面切割顯微鏡下的樣品。切割后，徠卡LMD系統利用重力將解剖物收集到試樣下方的容器內。
 
單細胞精度下的生物標記物探索工作流程
徠卡激光顯微切割系統能夠精準切割您感興趣的單個細胞，改進您的工作流程。所以工作都在可視化控制之下，不會污染到周圍組織。


1. 樣本制備

激光顯微切割通常會用到專門的薄膜切片。LMD的樣本制備較為直觀，可以從組織學的經典制備方法中獲得。 下游蛋白質組學方面，我們推薦使用PET薄膜切片（幾乎不存在軟化劑）或DIRECTOR™切片以滿足*無薄膜消融。 石蠟包埋使組織樣品形成組織，可以切成薄片。或者可以利用冷凍切片來制備樣本切片。 我們將提供最合適您應用的LMD切片。

 




 
2. 固定和染色

LMD應用中可根據感興趣的結構來對組織進行固定和染色。此處包括了明場和熒光染色。 該步驟可通過染色設備實現自動化處理。 絕大多數染色劑一般都與下游蛋白組學相容。盡管如此，我們依然有必要做提前的調查。

 
3. 可視化和ROI

徠卡LMD系統可自動化生成樣品的全玻片圖像概覽，輕松導航至您的感興趣區域（ROI）。 ADM軟件模塊能夠識別出您的感興趣區域并自動標記形狀，或者您可以手動勾勒出形狀。 有關徠卡LMD系統的更多信息 激光顯微切割文章與教學

 




小鼠大腦，甲酚紫。運行ADM軟件模塊前后，自動識別和檢測神經元。
4. 激光顯微解剖

接下來在目測控制下通過激光切出特定的ROI并直接通過重力作用進行收集。 點擊鼠標即可分離出癌癥材料或任何其他ROI并進行必要的匯集，然后按需要收集到1個或多個不同的反應容器內。 您可以使用標準耗材如PCR試管，或者利用特定的LMD收集裝置將樣本直接收集到下游分析容器內如PCT μTubes試管（Pressure BioSciences Inc.），詳見下一步操作。

 
5. 蛋白質制備

小樣本的均質化、提取和酶解消化可利用如Pressure BioSciences Inc.的壓力循環技術（PCT）來完成。遵循LMD-PCT工作流程可快速、可再現地制備生物肽且整個過程不超過1小時（Lee S et al., Cell Reports 2020，doi.org/10.1016/j.celrep.2020.03.066），能夠節省出數小時時間而且小組織樣本的制備*不用“動手"。 有關該工作流程的更多信息敬請訪問： bit.ly/2AXxWdn

 




 
6. 分析
 通過質譜法分析樣本并識別出生物標記物。
典型研究領域

• 生物標記物探索

• 癌癥研究

• 個體化醫療

• 轉譯研究

• 蛋白質組學

• 代謝組學

 
參考文獻
1.    Lee S et al., Cell Reports 2020,
doi.org/10.1016/j.celrep.2020.03.066
2.    Hunt AL et al., Cancer Res 2019;79 doi.org/10.1158/1538-7445.AM2019-4709
3.    Guo T et al., Nat Med. 2015; 21:407-13
4.   Shao S et al., Proteomics 2015; 15: 1-11
 
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