冷凍切片機的使用方式以及注意事項

　　組織切片技術(shù)是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域中的重要技術(shù)，主要有石蠟切片、震動切片和冰凍切片等技術(shù)。其中冰凍切片技術(shù)的應(yīng)用越來越廣泛，其優(yōu)點就是快速、便捷，且能較完整的保存抗原活性，如細(xì)胞的某些抗原成分，特別細(xì)胞膜抗原，受體抗原，酶及肽類抗原在石蠟切片的處理過程中，不可避免的受到破壞或失去抗原活性，而且對于原位分子雜交等核酸探針雜交實驗，冰凍切片技術(shù)也成為切片技術(shù)。

　　儀器的操作系統(tǒng)主要由總開關(guān)、操縱面板1、操縱面板2、手輪和冷凍箱組成。總開關(guān)控制儀器的供電，儀器開機運行后，無特殊原因不要關(guān)閉總開關(guān)，若由于斷電或其他原因關(guān)閉總電源后，則必須要對冷凍箱及其附件進(jìn)行除菌和干燥處理后才能重新啟動儀器。

　　2 操縱面板1主要控制冷凍箱照明、溫度、除霜、時間設(shè)定等功能，并顯示切片厚度、切片模式等信息。

　　溫度調(diào)節(jié)包括箱體溫度(CT)和樣品頭溫度(OT)，OT溫度設(shè)定可比CT略高。不同的組織選用不同的溫度進(jìn)行切片，過高或過低的溫度均會影響切片的質(zhì)量，表1中是一些常用組織的參考切片溫度，具體采用的溫度還需操作者在實踐中進(jìn)行摸索。除霜是冰凍切片機每天均需進(jìn)行的操作，用于除去儀器運行過程中，箱體內(nèi)部產(chǎn)生的霜。LeicaCM3050S具有三種除霜模式：箱體自動除霜、箱體手動除霜和樣品頭手動除霜模式。箱體自動除霜每24小時自動進(jìn)行一次，具體時間可以人為設(shè)定(最好設(shè)定在00:00左右)，除霜結(jié)束后儀器自動降溫到設(shè)定值。自動除霜時程的默認(rèn)設(shè)置是8分鐘，如果儀器長時間使用后，除霜8分鐘無法使箱體解凍，可以通過增加除霜時程來解決。箱體手動除霜和樣品頭手動除霜模式可以通過選擇手動除霜鍵來進(jìn)行(一般不使用)。

　　3 操縱面板2主要控制電動切片、樣品頭升降、切片厚度和修片厚度。電動切片有三種模式：間歇模式、連續(xù)模式和單次模式。電動切片速度可以手動調(diào)節(jié)，電動切片的開啟和中斷可以手控或者通過腳踏板控制。樣品頭升降主要用來調(diào)節(jié)樣品和刀片之間的距離，具有粗調(diào)和細(xì)調(diào)兩種模式。

　　4 儀器使用后的操作。日常使用后需進(jìn)行一些處理：將OT設(shè)為0℃，CT設(shè)為-10℃,這樣既可以延長壓縮機的壽命又利于除霜過程的進(jìn)行;取出刀片并進(jìn)行除菌、干燥以備下次使用;清除箱體中的切片廢棄物;取出未使用的組織樣本另行保存;鎖定手輪和控制面板1。長時間不使用儀器可以將總開關(guān)關(guān)閉，但箱體和所有有關(guān)切片的附件均需進(jìn)行除菌和干燥處理。

　　5 包埋劑的使用。包埋劑主要用于將組織與樣品臺固定在一起，并包被組織以利于展片。包埋劑可選用常見的生理鹽水或PBS等緩沖液，近年來一種混合型包埋劑OCT，使用的越來越廣泛，OCT包埋后，組織切片更加平整。OCT是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，可以直接用于組織包被，也可以對組織進(jìn)行切片預(yù)處理后再切片。預(yù)處理方法：組織浸蔗糖后放入蔗糖與OCT 1:1體積比的混合液中，室溫2小時;放入OCT中室溫4小時(具體時間視組織大小而定)。

　　冰凍切片機使用注意事項

　　1、開機后速凍臺溫度非常低，請小心操作勿徒手接觸。

　　2、固定樣品時應(yīng)將樣品置于包埋盒底部，避免在進(jìn)行切片時先要進(jìn)行長時間的修片損壞磨損切片刀。

　　3、使用刷子掃除多余組織碎片時，請不要刷刀片頂部的刀刃，同時由下到上順著刀面輕刷。

　　4、切片過程中請將冷凍箱窗口留個小縫即可，不可大敞著口進(jìn)行切片。

　　5、切片完畢后務(wù)必將刀片護(hù)刀架放好，將手輪鎖死在12點位置。

　　6、如果切完樣品還有下一位同學(xué)需要用的話，可將機器的速凍臺和冷凍箱溫度調(diào)至-8℃，然后按鎖定鍵，機器即進(jìn)入待機狀態(tài)。

　　7、每次使用完畢一定要將切片機冷凍箱內(nèi)清理干凈，保持切片機的整潔。同時填寫《儀器使用記錄》，包括“使用日期、實際使用時間、使用者、機器狀態(tài)”。

　　8、如若要對帶有生物危害性的樣品進(jìn)行切片前，請?zhí)崆芭c儀器負(fù)責(zé)人再進(jìn)行切片。