會議回顧：2021年徠卡顯微成像用戶會深圳站

2021年11月5日，徠卡顯微成像用戶會在美麗的鵬城——深圳與大家如約而至，這也是我們第一次為一個城市的用戶舉辦成像技術交流會，當天，80余位專家、青年學者、研究人員參加了本次會議。由此可見近些年來深圳這座年輕的城市在科研單位建設上的突飛猛進，也能看出當地的科研工作者們擁抱新技術的熱情。
會上諸多Leica的資深用戶分享了自己的研究成果與心得體會，我們一起來回顧下吧。
講題一：FLIM技術在生命科學研究中的應用
講者：南方科技大學 魏聞捷 高級工程師

本次徠卡顯微成像技術交流會交流環節的開場報告由南方科技大學分析測試中心的魏聞捷老師帶來，報告題目為“FLIM技術在生命科學研究中的應用”。本次報告中，魏老師不僅向我們清晰地講解了什么是熒光壽命，如何在時域和頻域上測量熒光壽命，如何利用不可見的熒光壽命進行成像（FLIM），還分析了使用徠卡顯微鏡進行實驗得到的FLIM數據，充分證明了FLIM在可以得到除了光譜信息之外的時間維度上的更多信息。隨后魏老師引用了徠卡顯微鏡的實驗數據，介紹了FLIM在生命科學研究中的應用，內容包括FLIM-FRET在代謝組學研究中的優勢：可拍攝到光鏡下很難拍攝到的過程（如病毒侵染過程）；可進行瞬間/長時間的動態捕捉，定量精確，可重復性好，操作簡便；FLIM可利用自發熒光物質作為生物傳感器進行微環境的探測；FLIM可進行時間維度的熒光拆分等。除此以外魏老師介紹了常用的FLIM分析軟件和APP，并對徠卡的FLIM模塊給予了高度評價。魏老師坦言，徠卡的FLIM模塊已經整合進入徠卡共聚焦軟件，作為入門級的操作者，只要會使用徠卡共聚焦顯微鏡，就可以在進行高質量成像的過程中輕易獲取到FLIM數據，對用戶非常友好。徠卡顯微鏡的成像質量配合功能強大的FLIM功能，將會為生物科研工作者提供強有力的支持。

講題二：白激光在材料科學中的應用
講者：香港科技大學 何威

何老師在報告中提到，熒光在生活中無處不在，不同發光材料需要的激發光不同，常規可選激光譜線：405、488、514、561、633nm適用于生命科學，但不太能滿足發光材料科學的研究，往往無法達到最佳的激發效率，可能錯失細胞成像中一些有趣的現象。而徠卡白激光可實現1nm的步距連續調節激發光波長，助力于解決新開發的熒光材料成像問題。
何老師實驗室研究的新型熒光染料AIEgens（聚集誘導發光分子）可覆蓋整個可見光波段，乃至紫外和紅外，這就需要特別適合的激發光來進行生物成像，徠卡最新推出的STELLARIS 8白激光從440到790nm連續可調，可讓發光材料的骨架設計更加靈活，并且白激光為脈沖激光，可實現熒光壽命維度成像。另外最新研究的激發光依賴性的簇發光材料，通過波長步長可調的激發光光源照射會發射出不同波長的光，對于新材料在生物成像中的探索和應用起到了推動作用。
講題三：FLIM在生命科學及材料科學中的應用
講者：中國科學院深圳先進技術研究院 張鵬飛 副研究員

本次報告中，張鵬飛首先講解了新型熒光材料的優勢（抗漂白能力強、Stokes位移大等），隨后向我們介紹了他所帶領的研究團隊一路走來所開發的熒光材料（包括近紅外量子點、AIE染料等）及其應用，還和我們分享了他們團隊熒光材料開發的成果及寶貴經驗。將FLIM技術和新型近紅外量子點“強強聯合”后，張老師的團隊實現了通過將熒光壽命及強度進行二維結合，進一步實現了提高近紅外熒光材料的分辨能力、長時間活細胞成像、活體微環境實時監測等多項技術突破；通過STED技術與AIE材料的“兄弟合力”，張老師成功對活細胞骨架、活細胞的線粒體、溶酶體以及活體的腫瘤組織進行了長時間的成像。張老師在2012年發表的JACS中使用了徠卡SP5共聚焦顯微鏡，成功對病毒侵染細胞的過程進行了成像，他認為，徠卡的FLIM和STED成像技術可以對熒光材料的開發及應用方面發揮巨大作用，如今隨著徠卡STED和FLIM技術水平的不斷提升，該類設備會有更多的應用場景。
講題四：活細胞線粒體STED超分辨成像研究
講者：深圳大學 楊志剛 副教授

最后一位為大家帶來實驗分享的是深圳大學物理與光電工程學院的楊志剛老師，他介紹到線粒體內膜結構及動態變化研究可以預測免疫T細胞的免疫記憶能力，并且分裂線粒體的命運預測，為線粒體相關疾病的早期診斷與干預提供有效手段，而要研究這些，就涉及到超分辨成像。楊老師課題組利用熒光探針進行活細胞超分辨成像及結構測量研究，而綜合成像分辨率和成像速度，STED超分辨成像具有顯著優勢。STED成像效果受到熒光探針性能好壞的影響，想要獲得更高的分辨率，需要開發具有低損耗激光功率的新型熒光探針，楊老師實驗室對此展開了以下三個方面的研究：
1.活細胞線粒體膜鄰位二巰基蛋白質共價標記
2.低功率損耗激光（紅色、綠色活細胞長時程超分辨成像）
3.低功率單束激發光、單束損耗激光實現雙色或多色STED成像
最終開發了一種具有超低飽和損耗激光功率的新型方酸菁染料STED探針，用于活細胞線粒體長時程動態變化超分辨成像及結構測量，為線粒體功能研究提供新的手段，并致力于設計優化新型超分辨探針，進行同步多色STED成像，解決具體生物學問題。
除了各位用戶們精彩的科研分享，來自徠卡的各位應用專家們也向客戶們介紹了一些前沿技術，重新定義共聚焦的STELLARIS，融合了超分辨和熒光壽命的TauSTED，多光子活體成像新技術DIVE和多功能AI圖像分析軟件AIVIA。學術交流之后，各位參會者還積極的參加了現場的演示環節，從寬場到共聚焦，從硬件到軟件，大家紛紛表示，不斷推出的新產品，對于科研的促進作用是顯而易見，只是一天時間太短，不能充分的體會和感受。好消息是我們的樣機會在深圳停留一段時間，如果有興趣進一步了解，請聯系當地的徠卡工作人員吧，也期待我們來年再會。

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