直播回顧：抽絲剝繭，超多重免疫標記解密腫瘤微環境之奧秘

直播回放抽絲剝繭-超多重免疫標記解密腫瘤微環境之奧秘 
 
 
4月20日上午，徠卡與轉化醫學網共同舉辦了網絡研討會——“抽絲剝繭，超多重免疫標記解密腫瘤微環境之奧秘"。徠卡生命科學部的高級應用專員劉繼紅和Cell DIVE應用科學家Michael Smith為廣大觀眾揭示了CELLDIVE 超多重標記解決方案如何輕松應對復雜的腫瘤微環境，為臨床腫瘤的研究和治療提供了優秀的研究工具。Indica Labs應用科學家趙永田重點介紹了在HALO中對獲取的Cell DIVE圖像的處理、分析步驟以及如何進行高緯的空間生物學分析，用以了解腫瘤微環境中腫瘤細胞和免疫細胞的相互作用關系對研究腫瘤免疫應答的作用機制。
除了回放視頻供大家后續回顧學習，小編也為梳理了本次講座答疑環節觀眾所關心的重點：
Q&A
1，CELLDIVE使用的抗體是開放的嗎？有大約多少種經過驗證的抗體？
CELL DIVE 的抗體是開放的，有350種以上的抗體經過驗證的抗體可以使用。
 
2，CELL DIVE可以在臨床上用嗎，是否有注冊證？
目前沒有注冊證，正在申請中。
 
3，這個平臺的檢測聯系哪位呢？
可以聯系Leica公司各地的應用支持和銷售
 
4，這個染色是儀器自動染色嗎？
可以手動染色也可以和自動染色儀聯用自動染色
 
5，哪個實驗室可以檢測？
Leica公司有DEMO機，可以提供一定的演示。
 
6，成像是全片還是一個視野？
成像儀可以選擇全片成像或者選取一個或多個視野成像。
 
7，怎樣避免非特異性染色 ？核陽性的和胞漿包膜可以隨意搭配嗎？
首先要選擇特異性好的抗體，我們抗體庫的抗體都是經過驗證的抗體。
細胞核陽性和胞漿包膜理論上可以自由搭配。
 
8，每一輪染完了，除了染料失活，是不是還需要去除一抗？
每一輪染色成像完成，染料失活 不需要去除一抗。
 
9，CELLDIVE是不需要摸索一抗濃度的嗎，固定的protocol會不會造成有的組織染不出來有的組織卻染色過強？
徠卡的protocol適用于絕大多數的組織，有些組織的某個marker 表達特別高或者特別低，可能需要修改抗體濃度。
 
10，抗體是什么方法學檢測標記？除了主講人介紹的熒光濾鏡，能否使用其他的熒光標記和濾鏡
抗體驗證時參照同樣marker的免疫組化的結果；只能使用和CY2 CY3 CY5 CY7 光譜基本相同的染料標記。
 
11，成像也是設備自動化進行的嗎？
成像時設備自動進行的，但是可以在拍照前根據樣本的染色情況進行優化。
 
12, Did you find any nonspecific staining while utilizing the different CD markers for immune cells?（外國講者）
The Cell DIVE solution comes with a list of 350+ antibodies that have been validated for use with the workflow, and for specificity and sensitivity. For antibodies that are not used from the list, we provide details on a three part antibody validation process that also ensures that antibodies used are specific. In the case of residual nonspecific signal, this is likely removed by the autoflourescence imaging and removal of that signal that occurs at every round. So, in our hands, nonspecific staining is minimized at the level of antibody quality control and the image processing that the software performs.
 
 
13，關于細胞間鄰近距離的分析，我們如何設定所計算的距離范圍？
關于細胞間鄰近距離的分析，所定義距離的范圍目前還沒有相應的標準?？紤]到不同細胞亞型的相互作用，不同免疫細胞亞群之間鄰近距離的設定可能需要不同的標準。在分析中，HALO可以對距離進行設定，并按照不同的區間（例如0~5μm，5~10μm，10~15μm……）給出鄰近細胞的數量和密度。分析中先進行預分析，根據不同距離范圍內免疫細胞的密度和臨床信息進行相關性分析。再把確定的距離應用到所用的樣本切片中。
 
14，在分析過程中，我們可以選擇局部視野進行分析嗎？還是僅能對全組織切片進行分析？
分析中，我們建議針對全景組織切片進行分析，但HALO也可以定義ROI區域進行選擇性的視野進行分析。這兩種分析方法在HALO里都可以實現的。